PCR analýza: čo je to? Ako vziať analýzu PCR

Nebolo to tak dávno vyvinuli spoľahlivé, vysoko citlivú a rýchlu metódu pre diagnostiku rôznych infekčných chorôb u ľudí. Takýto spôsob sa nazýva "PCR analýza". Čo je to, čo je jeho podstatou, čo dokáže identifikovať mikroorganizmy a ako to vziať si popíšeme v tomto článku.

História objavu

Vynašiel polymerázovej reťazovej reakcie (PCR) je americký vedec Keri Myullis v roku 1983. Spočiatku, patentovaný spôsob diagnózy podľa "Cetus Corporation", v ktorom pracoval a jeho tvorca. Ale v roku 1992 všetky práva a patenty boli predané firme "Hoffman-La Roche." Za to, že sa ukázalo, že podobné štúdie boli vykonané paralelne a boli hlásené u iných amerických biológov, ako sú Elis Chen, David Edgar, John RRE. V roku 1980 sa podieľa na tomto probléme a sovietskych vedcov A. Slyusarenko A. Kaledin a S. Gorodetsky. Preto, aby sa zistilo jediným vlastníkom autorských práv, nebolo možné. Mnoho vynikajúcich biochemici prispeli k rozvoju metód polymerázovej reakcie a CERN patentovať svoje inovácie. V tomto okamihu analýza PCR sa vykonáva v priebehu špeciálne vybavených laboratóriách.

ZHRNUTIE PCR diagnostika

PCR analýza: čo to je a ako to funguje? Princíp spočíva v tom, že pomocou špeciálnej enzým DNA polymerázu in vitro k zvýšeniu objemovej špecifické mikrobiálne prostredie. K tomu opakovane násobiť dostupné DNA materiál. To znamená, že prítomnosť patogénu vo vzorke množstve sa zvýši na úkor biochemické laboratóriu manipulácie, a baktérie nebude ťažké zistiť v mikroskopu.

Ako je štúdium materiálu?

Vykonať požadované analýzy:

• DNA templát;
• Primery materiál spájajúcej konce fragmentu;
• termostabilná DNA polymeráza;
• chemikálie, zabezpečenie správnej funkcie enzýmov;
• tlmivý roztok, ktorý na vytvorenie vhodných podmienok pre rast a vývoj DNA materiálu nutné.

Na vykonanie PCR pracovať 25-30 repetície zložené z troch krokov: denaturácia, nasadanie a predĺženie.

Pre analýzu polimezarnoy reťazovú reakciu za použitia špeciálneho prístroja - cykleru. Moderné zariadenie umožňuje nainštalovať potrebné kúrenie a chladenie rúrok plán na odstránenie chyby pri stanovení diagnózy.

Kde predložiť žiadosť diagnózu?

Polimezarnoy reťazovej reakcie sa používajú v rôznych oblastiach medicíny:

• Súdne použitie sa pre identifikáciu genetického materiálu, ako sú vlasy, sliny alebo krvi;
• PCR analýza krvi pomáha Genotypizácia, napr. Pre detekciu jednotlivých genetickej vysadené reakcii na konkrétne liečivo;
• metódou set rodinných väzieb medzi ľuďmi;
• najvyhľadávanejších-PCR metóda sa stala v lekárskej diagnostike pre stanovenie rôznych infekčných chorôb.

Čo infekcia ukazuje PCR?

Tak prípravok už dlho úspešne použitý PCR analýzu. Čo sa deje, sme sa už naučili. A niektoré patogény môžu byť detekované s ním? PCR diagnostikovaná nasledujúce infekcií :

• hepatitída A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidóza;
• chlamýdie;
• mykoplazmózy;
• bakteriálne vaginóza;
• infekčnej mononukleózy;
• trichomoniáza;
• HPV infekcie;
• tuberkulóza;
• herpes infekcie 1. a 2. typu;
• Infekcia Helicobacter pylori;
• cytomegalovírus;
• záškrtu;
• salmonelóza;
• HIV infekcia.

Tiež PCR metódy sú používané v diagnóze rakoviny.

výhody spôsobu

Diagnostické PCR má niekoľko výhod:

1. Vysoká citlivosť. Dokonca aj len niekoľko molekúl DNA mikroorganizmu PCR analýza určuje prítomnosť infekcie. Pomáha metódu pre chronické a latentné ochorenie vyskytujúce. Často sa v takýchto prípadoch, mikroorganizmus je nekultivovaný inými spôsobmi.
2. Za účelom skúmania akýkoľvek vhodný materiál, ako je napríklad slín, krvi, pohlavný výber, vlasy, epitelových buniek. Najbežnejšia je krvný test a urogenitálneho tampón PCR.

3. Nevyžaduje predĺženej rastúcich kultúr. Automatizovaný proces diagnostiky umožňuje získať výsledky štúdie, po 4-5 hodinách.
4. Táto metóda je takmer úplne autentický. Zaznamenaný len ojedinelé prípady falošne negatívny výsledok.
5. Schopnosť identifikovať niekoľko typov patogénov v jednej vzorke materiálu. To urýchľuje nielen celý proces diagnózy ochorenia, ale tiež výrazne znižuje náklady na materiál. Často lekár predpísal komplexnú analýzu PCR. Cena prieskum, ktorý sa skladá zo stanovenia šesť patogénov, je asi 1500 rubľov.

Odporúčania pre prípravy na stanovenie

Výsledky platná štúdie PCR je potrebné otestovať, na základe odporúčania predbežných prípravkov pre diagnózu:

1. Pred dodaním slín zdržať sa jedla a liečivá po dobu 4 hodín pred odberom materiálu. Bezprostredne pred zákrokom, vypláchnuť ústa prevarenou vodou.
2. Vyššie uvedené pravidlá musia byť vedené a pri odbere vzorky z vnútornej strany líca. Po opláchnutí sa odporúča vykonávať ľahkú masáž na koži uvoľniť prostatického sekrétu.
3. Moč sa obvykle zhromažďujú doma. Ak to chcete vykonať, je nutné vykonať dôkladné WC na genitáliách. V sterilnej nádoby z plastickej hmoty, je potrebné zhromaždiť 50-60 ml moču. Je doporučené, aby ženy vložte tampón do vagíny a muži čo najviac vytiahnuť kožný záhyb na zabezpečenie čistoty materiálu. Nemôžete vziať materiálu počas menštruácie.
4. Na dodávku spermií zdržať pohlavného styku počas 3 dní pred odberom materiálu. Tiež lekári odporúčané, aby upustila od užívania sauny a horúcej vane, alkohol a korenené jedlá. Počas 3 hodín pred analýzou, je nevyhnutné, aby sa zdržala močenie.
5. Odovzdať urogenitálne ostrosť obrazu, napríklad v prípade, že analýza na chlamýdie PCR, žien i mužov je odporúčané, že sexuálna odpočinok po dobu 3 dní. 2 týždne pred analýzou nemožno brať antibiotiká. Po dobu jedného týždňa budete musieť prestať používať intímnych gélov, masti, vaginálne čapíky, sprchovanie. 3 hodiny pred štúdie by mali zdržať močenie. V priebehu menštruácie plot materiál nie je vykonané, iba 3 dní po ukončení nanášania môže trvať urogenitálny rozmazaniu.

PCR v priebehu tehotenstva

Čakacia doba pre dieťa, mnoho infekčných ochorení, sexuálne prenosných chorôb, sú veľmi nebezpečné pre normálny vývoj plodu. Pohlavne prenosné choroby môžu vyvolať vnútromaternicový vývoj, potrat alebo predčasný pôrod, vrodené chyby dieťaťa. Z tohto dôvodu je dôležité, aby sa na začiatku tehotenstva skríning PCR. Prejsť analýza je nutné pri registrácii - až 12 týždňov.

Plot materiál pochádza z krčka maternice s špeciálnymi štetcami. Postup je bezbolestný a nepredstavuje žiadne nebezpečenstvo pre dieťa. Normálne počas tehotenstva analyzoval pre metódu PCR Chlamydia, rovnako ako ureaplasmosis, mykoplazmózy, cytomegalovírusu, herpes, papilloma vírusu. Taká vyšetrenie komplex nazýva PCR 6.

PCR pre diagnózu HIV

Vzhľadom na to, že metóda polymerázovej reťazovej reakcie je veľmi citlivé na zmeny v tele a podmienok diagnostiky, mnoho faktorov môže mať vplyv na výsledok. Preto PCR analýza pre infekcie HIV, nie je spoľahlivá metóda, jeho účinnosť - 96 až 98%. Zostávajúce 2-4% testu dáva falošne pozitívne výsledky.

Avšak v niektorých prípadoch bez PCR diagnostiku HIV nemôže robiť. Obvykle sa robí na ľudí s falošne negatívnych ELISA. Tieto údaje ukazujú, že osoba ešte vyvinutý protilátok proti vírusu a nedá zistiť bez zvýšenia počtu násobku. To môže byť dosiahnuté tým, že vykonáva krvný test metódy PCR.

Tiež potrebujeme, je diagnóza u detí v prvom roku života, narodilo HIV pozitívnym matkám. Táto metóda je jediný spôsob, ako spoľahlivo zistiť stav dieťaťa.

PCR pre diagnostiku hepatitídy

Polymerázová reťazová reakcia spôsob umožňuje detekciu DNA vírusu hepatitídy A, B, C, predtým, než k tvorbe protilátok proti infekcii alebo nástupu príznakov. Zvlášť efektívne je PCR analýza na hepatitídu C, od 85% tejto choroby je asymptomatická a bez včasného ošetrenia stáva chronickou.

Včasné rozpoznanie patogénu pomôže vyhnúť sa komplikáciám a dlhodobú liečbu.

screening Integrovaný PCR

Komplexné PCR Analýza: Čo je to? Tento skríning metóda polimezarnoy reťazovú reakciu, ktorá zahŕňa stanovenie súčasne niekoľko druhov infekcie: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, cytomegalovírus, Ureaplasma urealitikum, herpes 1. a 2. typu, kvapavka papilomavírusu. Cena tejto diagnózy sa pohybuje v rozmedzí od 2000 do 3500 rubľov. v závislosti na klinických, materiálov a zariadení, ako aj od druhu analýzy: kvalitatívne alebo kvantitatívne. Čo je potrebné vo vašom prípade - lekár rozhodne. V niektorých prípadoch stačí jednoducho detekovať prítomnosť patogénu v iných odvetviach, ako je HIV, dôležitú úlohu, ktorú hrajú kvantitatívne titra. len "PCR analýza 12" v diagnostike všetky vyššie uvedené skúšky patogény.

Rozlúštenie výsledkov analýzy

Transkripcia PCR analýza je jednoduché. Existujú iba 2 index stupnice - "negatívny" "pozitívne" a Po detekcii patogénu môže lekári s 99% spoľahlivosťou tý potvrdiť prítomnosť ochorenia a začať liečbu pacienta. V kvantitatívnom spôsobe stanovenia infekcie v zodpovedajúcom číslom indexe stĺpec detegovaných baktérií budú špecifikované. Iba lekár môže určiť rozsah ochorenia a predpísať potrebnú liečbu.

V niektorých prípadoch, napríklad pri určení infekcie HIV pomocou PCR, s negatívnym výsledkom, že je potrebné pre ďalší prieskum, ktorý má potvrdiť tieto údaje.

Kde sa nechať vyšetriť?

Kde zložiť-PCR analýzu vo verejnom klinike alebo v súkromnej laboratóriu? Bohužiaľ, v mestskej inštitúcie zariadení medicínskeho a metódy sú často zastarané. Preto je lepšie dať prednosť súkromných laboratórií s moderným vybavením a vysoko kvalifikovaných pracovníkov. Okrem toho na súkromnej klinike dostanete výsledky oveľa rýchlejšie.

V Moskve, mnoho súkromné laboratóriá ponúkajú PCR analýzu rôznych infekcií. Napríklad v takých kliník ako "Vita", "integrované Clinic", "Šťastná rodina", "Uro-Pro", vykonáva PCR analýzu. cena prieskum je 200 rubľov. pre stanovenie patogén.

Je možné urobiť záver, že diagnóza infekčných chorôb pomocou PCR vo väčšine prípadov je rýchly a spoľahlivý spôsob detekcie patogénu v tele v skorých štádiách infekcie. Napriek tomu, v niektorých prípadoch, voliť iné metódy diagnostiky. Určite nutnosť takéto štúdie, môže byť len odborníkom. PCR analýza Dešifrovanie tiež vyžaduje profesionálny prístup. Riaďte sa presne pokyny svojho lekára a nedávajú svoje vlastné testy, ktoré nie sú potrebné.